3）柠檬酸缓冲液

平衡液（A液）：20mM，pH可选为3.5、4.0、4.5、5.0、5.5

洗脱液（B液）：一般在A液中添加1M NaCl

柠檬酸缓冲液一般用于分离纯化酸性蛋白质，注意，柠檬酸缓冲液不能用于CHT羟基磷灰石。

二、 CHT羟基磷灰石

羟基磷灰石最常用的缓冲液是磷酸钠缓冲液，也可用磷酸钾缓冲液，所有梯度洗脱体积一般为10－20个柱床体积，一般起始条件如下：

1、 单梯度洗脱：

平衡液（A液）：5mM PB， pH 7.0、7.5、8.0

洗脱液（B液）：400mM PB，

梯度一般为0——30％B、50％B、70％B、100％B等。

可在单梯度缓冲液（A液和B液）中加入低浓度NaCl已优化分离效果，一般加入20－50mM的NaCl。

2、双梯度洗脱：

平衡液（A液）：5mM PB， pH 7.0、7.5、8.0

洗脱液I（BI液）：A液含1M NaCl，梯度可从0——50％B，

洗脱液II（BII液）：400mM PB，梯度一般为0——30％B、50％B、70％B、100％B等

三、疏水层析

常用中性缓冲液为初始条件，例如PB，一般以高浓度硫酸铵作为平衡液（A液），无硫酸铵的低浓度缓冲液为洗脱液（B液），样品的背景必须与A液一致，即必须含有2M硫酸铵然后过滤脱气处理，例如：

平衡液（A液）：10mM PB，含2M硫酸铵， pH 7.0、7.5、8.0

洗脱液（B液）：10mM PB，pH 7.0、7.5、8.0，梯度初始可为0——100％B，然后再调整。

四、凝胶过滤（分子筛）

常用中性缓冲液，例如PB，不需梯度洗脱，常用缓冲液如：20mM PB含50mM NaCl，pH7.5等 。

五、亲和层析：

亲和层析类型最多，不同介质配基的洗脱条件不同，但洗脱一般不需摸索即可纯化出目标蛋白质。